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一、常見(jiàn)母種培養(yǎng)基有以下幾種：

1.PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g、瓊脂1820g、葡萄糖20克g，水1000ml，pH自然。此培養(yǎng)基廣泛適用于各種菇類(lèi)，但不適合草菇、猴頭菇菌絲的生長(zhǎng)。

2.馬鈴薯綜合培養(yǎng)基：馬鈴薯200g、瓊脂20g、葡萄糖20g，磷酸二氫鉀1.5g，硫酸鎂1.5 g，維生素B15～10g，水1000ml，pH自然。此配方適合雞腿菇、平菇、雙孢蘑菇、金針菇、草菇等菇類(lèi)菌絲生長(zhǎng)。如在配方中加入蛋白胨20g，猴頭菇菌絲生長(zhǎng)會(huì)更加旺盛、粗壯。

二、母種培養(yǎng)基的制作方法如下：

1.浸煮容器   一般選用玻璃容器、不銹鋼鍋或鋁鍋、搪瓷鍋等，生產(chǎn)中不能用鐵鍋、銅鍋，以免鐵銹、銅銹混進(jìn)培養(yǎng)基。

2.配制方法  先按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱(chēng)量培養(yǎng)基的各種成分，再進(jìn)行配制。以配制馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基為例，介紹其培養(yǎng)基配制方法如下。

選整齊且沒(méi)有芽變（芽變綠）的馬鈴薯，洗凈去皮并挖掉芽眼，切成薄片，稱(chēng)取200g放入容器內(nèi)，加入1 000ml水，加熱煮開(kāi)15～30分鐘，至酥而不爛的程度，用四層紗布過(guò)濾（見(jiàn)圖1所示），取其濾液，加開(kāi)水補(bǔ)足1 000ml。然后在煮汁中加入稱(chēng)量好的瓊脂，用小火加熱，并不斷用玻璃棒攪拌，至瓊脂全部融化，再用紗布過(guò)濾一次，倒入量杯，用開(kāi)水補(bǔ)足1 000ml。再加入葡萄糖(或蔗糖)，用小火再煮幾分鐘并用玻璃棒不斷攪拌，待葡萄糖（或蔗糖）全部融化，?；鸬谷肓勘⒂瞄_(kāi)水補(bǔ)足1 000ml。在配制過(guò)程中，先加入主要元素，再加入微量元素，最后加入維生素或生長(zhǎng)素等。如需讓培養(yǎng)基清亮透明，可用紗布將煮好的培養(yǎng)基趁熱過(guò)濾一次，倒入容器，待用。

3.分裝   培養(yǎng)基配好后，應(yīng)趁熱將其分裝到試管內(nèi)，以免瓊脂冷凝。分裝時(shí)應(yīng)避免培養(yǎng)基粘附在試管口，若瓊脂粘住棉塞，既影響接種又容易滋生雜菌。分裝時(shí)可用漏斗分裝，裝入試管中的量，最好不要超過(guò)試管長(zhǎng)度的1/5，如圖2所示。

4.塞棉塞   培養(yǎng)基分入試管后，應(yīng)立即塞好棉塞。應(yīng)用普通棉花（不能用脫脂棉，因其易吸水變潮，滋生雜菌）做棉塞。棉塞塞入試管的長(zhǎng)度應(yīng)為棉塞長(zhǎng)度的2／3，松緊度適中，既能保持通氣又能防止雜菌污染，即用手握住棉塞，試管不能掉下，稍微用力才能把棉塞拔下為好，見(jiàn)圖3。

塞好棉塞后，每5支或7支包扎一捆，棉塞部分用牛皮紙或舊報(bào)紙用繩捆好。包紙的作用是防止滅菌時(shí)冷凝水淋濕棉塞，并防止接種前培養(yǎng)基水分散失或受雜菌污染。

5.滅菌及擺斜面   試管包扎好后，放入手提式高壓鍋的消毒桶內(nèi)，蓋蓋滅菌。待壓力升至0.05兆帕?xí)r，打開(kāi)排氣閥，放凈鍋內(nèi)冷空氣，再加壓至0.15～0.17兆帕，維持30分鐘，停止加熱。待鍋內(nèi)壓力下降為0后，先將鍋蓋打開(kāi)一小縫，使熱氣溢出，停3～5分鐘后，再打開(kāi)鍋蓋。利用鍋內(nèi)的余熱將棉塞烘干，防止棉塞受潮。待溫度降至60℃左右，再擺成斜面，以防止冷凝水在試管內(nèi)積聚過(guò)多。

擺放斜面時(shí)，試管塞棉塞的一頭下面墊厚1厘米的木板或鋼板等，斜面長(zhǎng)度不要超過(guò)試管長(zhǎng)度的1／2，待冷卻后即成斜面培養(yǎng)基，如圖4、圖5所示。

6.無(wú)菌培養(yǎng)  滅菌后的培養(yǎng)基，應(yīng)隨機(jī)抽取幾支放在25℃左右的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)2～3天，若無(wú)雜菌生長(zhǎng)，便可做菌種使用。

三、母種的轉(zhuǎn)管與培養(yǎng)  

母種的轉(zhuǎn)管培養(yǎng)即將一支長(zhǎng)滿菌絲的試管在無(wú)菌操作下，分別轉(zhuǎn)接到多只試管中培養(yǎng)。一般每支母種可擴(kuò)接30～50支，生產(chǎn)上供應(yīng)的多為子代母種。它可以再次轉(zhuǎn)管擴(kuò)接。一般每支又可擴(kuò)接成20～25支子代母種。母種的轉(zhuǎn)管與培養(yǎng)需注意兩個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題，一是轉(zhuǎn)管接種箱要嚴(yán)格消毒，二是轉(zhuǎn)管次數(shù)不宜過(guò)多，因轉(zhuǎn)管代數(shù)過(guò)多易使菌種生活力降低，轉(zhuǎn)管次數(shù)在4次以?xún)?nèi)為宜。

1.接種箱消毒  首先用金星消毒液或其他消毒藥品，把接種箱內(nèi)擦拭干凈，然后放入分離所得的母種和試管培養(yǎng)基、接種工具、酒精燈、火柴及盛放高錳酸鉀與福爾馬林反應(yīng)的碗（按福爾馬林10ml/m3＋高錳酸鉀5g放入所盛碗內(nèi)），立即封閉接種箱，讓其發(fā)生反應(yīng)，密閉熏蒸30分鐘。也可用煙霧消毒盒5～6g/m3，密閉熏蒸30分鐘。

   2.轉(zhuǎn)管  操作者在轉(zhuǎn)管前，應(yīng)穿好工作服，剪好指甲，洗凈手。將手通過(guò)袖筒伸入接種箱內(nèi)，再用酒精棉球把手及裸露的手腕擦拭一遍。點(diǎn)燃酒精燈，左手持1支分離母種試管和1支斜面培養(yǎng)基，右手拿接種鉤（見(jiàn)圖6-a），首先將接種鉤在酒精燈外焰上灼燒滅菌，接著用右手小指和無(wú)名指把斜面母種上的棉塞在火焰上拔掉（見(jiàn)圖6-b、圖6-c），將接種鉤伸進(jìn)斜面菌種試管，稍冷卻后，將母種斜面上的老菌塊及干燥部分挖掉，棄之不用，然后取一小塊麥粒大?。?cm×0.3cm）的菌種塊（一定要帶培養(yǎng)基）移接到斜面培養(yǎng)基的中央，抽出接種針，灼燒試管口，迅速將棉塞通過(guò)火焰烤一下塞上（見(jiàn)圖6-d、圖6-e、圖6-f）。在試管上貼上標(biāo)簽。以此類(lèi)推。直至把接種箱內(nèi)斜面培養(yǎng)基接完為止，一般由一個(gè)人獨(dú)立完成。此操作中既要注意試管口和接種鉤始終不要離開(kāi)火焰無(wú)菌區(qū)，還要注意避免火焰燒死菌種。

3.培養(yǎng)  菌種接好后，直接轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱或培菌室內(nèi)培養(yǎng)，溫度調(diào)節(jié)在24～28℃，并注意培養(yǎng)室內(nèi)的通風(fēng)換氣，遮掩窗戶，避免光線過(guò)強(qiáng)，經(jīng)常檢查，及時(shí)揀出雜菌污染的試管，確保菌種純度。菌種菌絲長(zhǎng)滿試管后，或及時(shí)使用，或放置在4℃以下的冰箱內(nèi)低溫保藏。

值得注意的是：母種培養(yǎng)基制作過(guò)程中，嚴(yán)格按照無(wú)菌操作規(guī)程進(jìn)行。選好培養(yǎng)基配方，按其比例嚴(yán)格稱(chēng)量原料，不可多也不可少，否則菌絲生長(zhǎng)會(huì)受到嚴(yán)重影響。制作好的母種培養(yǎng)基，可用于母種的分離培養(yǎng)、提純復(fù)壯及轉(zhuǎn)管、保藏等。

四、純種分離  

生產(chǎn)上常用組織分離法進(jìn)行母種菌種的分離。組織分離法是從種菇上切去一小塊組織移接于試管斜面培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)獲得菌種的方法。該方法具有操作簡(jiǎn)單，有利于保持原來(lái)品系的遺傳特性，成功率高等特點(diǎn)。

1.種菇選擇  選種菇時(shí)，應(yīng)到生長(zhǎng)旺盛、無(wú)嚴(yán)重病蟲(chóng)害的豐產(chǎn)區(qū)，采取菇朵圓整、菇體潔白、菌蓋肥厚且緊密硬實(shí)、菇柄短且粗壯，具有原品種優(yōu)良性狀、6～7成熟的第二茬單生菇作為種菇。

2.種菇消毒  種菇選好后，去除表面雜質(zhì)及菌柄，用75%的酒精棉球擦試種菇表面，然后把斜面試管隨同接種工具（如接種刀、接種鏟、接種鉤、鑷子等）一同放入接種箱內(nèi)，用氣霧消毒劑5g/m3點(diǎn)燃密閉熏蒸30分鐘。

3.分離  用消毒過(guò)的接種刀，把種菇縱剖為二，在菇蓋與菇柄連接處的部位，切取綠豆粒大?。s0.2cm×0.2cm）的菌肉，移接到斜面培養(yǎng)基的中央。然后把接好的試管放入恒溫25℃的無(wú)菌環(huán)境中培養(yǎng)，2～3天后，組織塊就能長(zhǎng)出白色菌絲，經(jīng)檢查、優(yōu)選，選出菌絲生長(zhǎng)旺盛且無(wú)雜菌的試管，作為母種，用于生產(chǎn)或保藏。