掌握成熟的菌種選育與復壯技術，是實現(xiàn)蛹蟲草規(guī)范化栽培的前提條件。
1.菌種選育
一般采用組織分離法進行菌種選育，此法具有操作方便，菌絲萌發(fā)快，能保持原菌種的優(yōu)良種性等特點。
（1）選優(yōu)良菌株。從野外或者室內(nèi)選生長健壯、大小適中、無病蟲害八成熟的、第一批優(yōu)良蛹蟲草菌株。
（2）消毒。將鮮蛹蟲草用清水洗去外表泥土，用75%酒精浸泡3～5秒鐘，無菌水沖洗2～3次，再用0.1%升汞水溶液消毒l～3分鐘，用無菌水沖洗3～5次，洗凈后進行分離。從室內(nèi)選的菌株僅需酒精消毒，無菌水沖洗即可。
（3）分離?？v剖有龜背狀花紋的蛹蟲草頂端組織子實體，用尖頭鑷子取內(nèi)部白色組織塊，取綠豆粒大的組織接種到已消毒的斜面培養(yǎng)基中部。
（4）培養(yǎng)。把已接種的斜面培養(yǎng)基放在培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)室殺菌消毒，避光，保持培養(yǎng)室的溫度25℃左右，空氣濕度60%左，經(jīng)常檢查，把污染的去除，培養(yǎng)5～10天，菌種已培養(yǎng)好，挑選性狀優(yōu)良的菌種作為母種。
（5）優(yōu)良菌種標準。白色菌絲粗壯濃密，且緊貼培養(yǎng)基匍匐狀生長，邊緣整齊，氣生絨毛狀菌絲少，見光后菌絲變?yōu)殚冱S色。
2.菌種提純
（1）消毒。將優(yōu)良母種和已消毒的斜面培養(yǎng)基試管放入超凈工作臺內(nèi)。先用肥皂洗凈雙手，再用75%酒精棉球擦手和菌種管表面，在酒精燈火焰上灼燒消毒。
（2）轉(zhuǎn)管。轉(zhuǎn)管時兩手從接種孔伸入超凈工作臺內(nèi)，75%酒精棉球擦拭接種環(huán)。左手持菌種管和斜面管，兩支試管口對齊于火焰上方。右手持接種環(huán)，并將其在酒精燈火焰上干熱滅菌，用小指及無名指拔掉棉塞，使棉塞底部朝外。接種環(huán)冷卻后伸入菌種管內(nèi)取黃豆粒大并帶有薄薄培養(yǎng)基的菌絲塊，迅速移入斜面培養(yǎng)基的中部，菌絲朝上。然后，將棉塞在火焰上燒一下，立即塞入試管口，旋緊棉塞。接種環(huán)不要觸碰管口及管壁，以防感染。適溫培養(yǎng)5～10天左右即可。
3.出草實驗
將提純菌種，在無菌條件下接種到培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室培養(yǎng)。在溫度為18～22℃，濕度適宜的條件下培養(yǎng)20～30天，即可形成橙紅色子實體。
4.菌種復壯
菌種繁殖應無性繁殖與有性繁殖交替進行，否則菌種性狀易退化，其表現(xiàn)為出草不整齊、畸形，甚至不出草。因此，在生產(chǎn)過程中應及時對菌種進行有性繁殖來提純復壯。
（1）消毒。選取高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、早熟的蛹蟲草子實體消毒。
（2）接種。將消毒的子實體懸掛于裝有PDA培養(yǎng)基的無菌三角瓶內(nèi)。
（3）培養(yǎng)。接種的三角瓶在25℃左右條件下，在無菌室靜置培養(yǎng)一天，當三角瓶的培養(yǎng)基表面出現(xiàn)大量蛹蟲草的白色菌絲時，在超凈工作臺上挑取單個或多個菌絲，用接種環(huán)接種到試管斜面培養(yǎng)基中部進行培養(yǎng)。當蛹蟲草菌絲布滿斜面后再提純。獲得的母種經(jīng)出草試驗后，選擇優(yōu)質(zhì)蛹蟲草子實體再進行組織分離法培養(yǎng)，獲取的母種可以擴繁栽培種。
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