金針菇是我國食用菌工廠化栽培的主要品種之一。目前，工廠化栽培已成為金針菇的主要生產(chǎn)模式，液體菌種逐步代替固體菌種用于金針菇工廠化生產(chǎn)是今后發(fā)展的必然趨勢。開展金針菇液體菌種研發(fā)和工廠化生產(chǎn)應(yīng)用可有效提高企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，促進(jìn)產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展。
1. 培養(yǎng)基
金針菇液體菌種制備主要涉及三種培養(yǎng)基，分別是PDA固體培養(yǎng)基、搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵罐培養(yǎng)基等。目前已報道了多種搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方，都取得了明顯實效。
1.1 搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基
配方 1：葡萄糖 20g，蛋白胨 2g，磷 酸二氫鉀 1g，硫酸鎂 0.5g，檸檬酸三鈉 1g，氯化鈣0.1g， 硫酸亞鐵 1mg， 硫酸錳 1mg，VB10.1μg，VB20.1μg，水 1000mL。
配方 2：可溶性淀粉 40g，葡萄糖 10g，蛋白胨 3g，磷酸二氫鉀 1g，硫酸鎂 0.5g，VB110μg，VB250μg，水1 000mL。
1.2 發(fā)酵罐培養(yǎng)基
配方 1：馬鈴薯 150g，麩皮 30g，蔗糖 20g，磷酸二氫鉀 1g，硫酸鎂 0.5g，水 1000mL。
配方 2：豆粕粉 40g，白砂糖 10g，磷酸二氫鉀 1g，硫酸鎂 0.5g，VB1100μg，VB2500μg，水 1000mL。
配方 3：玉米粉 50g，麩皮 30g，磷酸二氫鉀 1g， 硫酸鎂 0.5g，VB10.1μg，VB20.5μg， 水 1000mL。
在發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，一般加入適量的消泡劑，如聚二甲基硅氧烷乳液等，可有效防止泡沫的形成，避免泡沫對液體菌種發(fā)酵過程造成影響。
2. 液體菌種制備過程
在金針菇工廠化液體菌種制備過程中，為有效縮短生長周期和避免不必要的污染，企業(yè)多采用搖瓶液體種子直接接入發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，其具體工藝為：試管或平板固體菌種→搖瓶發(fā)酵→發(fā)酵罐菌種→接種栽培料。具體過程如下：
2.1 平板接種菌種
選用 PDA 平板培養(yǎng)基，于平板中央接種一塊直徑約 0.5cm 的菌種塊，25℃條件下培養(yǎng)。金針菇氣生菌絲發(fā)達(dá)，一般 6~7d 即可長滿整個平板。建議使用平板（9cm 培養(yǎng)皿）來培養(yǎng)固體菌種，一是有利于觀察菌種的氣生菌絲生長狀況，二是有利于從菌落邊緣打孔。
2.2 搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)菌絲
利用 1000mL 搖瓶， 裝入 600mL 發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌后備用。用打孔器從平板菌落邊緣打孔，接種到搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量為8~10塊固體菌種（直徑 5mm）。轉(zhuǎn)速 160r/min，23℃培養(yǎng) 6~7d。為防止菌絲球凝結(jié)在一起，可利用磁力攪拌器將種子液中的菌絲塊打散 。
2.3 發(fā)酵罐接種菌種
利用 1 000L 氣動式發(fā)酵罐，裝入 800L 發(fā)酵培養(yǎng)基，高壓蒸汽滅菌后備用。接種量為 1%~2%，23℃條件下培養(yǎng) 6~7d，即可放罐，用于接種栽培料。
3. 注意事項
3.1 防止雜菌污染
液體菌種制種效率高，易實現(xiàn)工廠化操作，但雜菌污染是液體菌種制備過程中不容忽視的問題。特別是中小型金針菇生產(chǎn)企業(yè)，抗風(fēng)險能力弱，一旦發(fā)生雜菌污染，極有可能造成破產(chǎn)倒閉。造成雜菌污染的原因主要有三個：一是技術(shù)操作問題；二是發(fā)酵罐及附屬設(shè)備滲漏；三是菌種染菌。
針對以上問題，建議企業(yè)可采取如下措施，將風(fēng)險控制到最低范圍。定期培訓(xùn)技術(shù)操作人員，提升技術(shù)操作人員理論和操作水平；建立發(fā)酵車間操作規(guī)范，引導(dǎo)技術(shù)人員按章操作；定期檢查和維護(hù)設(shè)備，避免設(shè)備跑冒滴漏；定期開展菌種純化和檢驗工作，利用平板培養(yǎng)、顯微鏡觀察等方法，及時判斷菌種是否感染雜菌等。
3.2 維護(hù)菌種穩(wěn)定
菌種是企業(yè)生產(chǎn)的核心，維護(hù)菌種穩(wěn)定是企業(yè)高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的關(guān)鍵。企業(yè)應(yīng)每周對液體菌種進(jìn)行一次抽樣檢測，檢測方法有回接平板培養(yǎng)、顯微鏡觀察等，通過觀察氣生菌絲生產(chǎn)狀況、鎖狀聯(lián)合有無（見圖 2）等初步判斷菌種質(zhì)量，防止菌種退化對企業(yè)造成不可挽回的損失。研究發(fā)現(xiàn)，利用加入溴百里芬藍(lán)的 LBL 液體培養(yǎng)基可排除退化嚴(yán)重菌株，退化嚴(yán)重的菌株脫色能力差，建議生產(chǎn)企業(yè)可推廣使用。
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